Alexa Fluor350 荧光染料（AF350）标记试剂盒说明书

产品名称                                                 

Alexa Fluor350荧光染料（AF350）快速标记试剂盒

产品货号                                                 

ZXLAF-3001A

包装规格                                                  

4次标记/盒（0.1mg蛋白/次标记）

预期用途                                                 

用于含氨基（NH2-）的抗体、蛋白、细胞、核酸、激素、抗生素、生物碱等分子的Alexa Fluor350荧光染料（AF350）快速标记。适用于化学发光、流式细胞术、Elisa、免疫印迹（WB）、免疫荧光染色、免疫组化、细胞学、单分子、蛋白纯化等免疫检测系统。

标记原理                                                 

本试剂盒采用高活性的AF350荧光染料活化物质，结合简约高效的滤过装置实现对各类物质的AF350荧光染料快速标记。试剂盒中已处于高活化态的有效成分，能与待标记分子上的氨基（NH2-）特异性结合，形成稳定的偶联物。过量游离的活化成分可通过试剂盒中的配套的滤过装置去除，以达到纯化和终止偶联的目的。偶联物收集后可直接使用或根据需要进行凝胶过滤提纯后使用。

主要组成成分                                             

(1) R1试剂：AF350荧光染料    4支

(2) R2试剂：AF350荧光染料溶剂    2mL×4支

(3) B1试剂：置换液    1.5mL×1支

(4) B2试剂：清洗液    5mL×1瓶

(5) M1设备：滤过浓缩管    4支

下列试剂或仪器标记操作时需要，但不包含在本试剂盒中：

(1) 移液器：10μL、200μL、1mL

(2) 37±1℃水浴锅或培养箱

(3) 震荡仪

(4) 离心机

储存条件及有效期                                         

(1) 储存有效期：2～8℃条件下，有效期为12个月；

(2) 试剂盒开封后，未溶解使用的R1试剂≤-20℃保存；

(3) 生产日期和使用期限：详见产品外包装标签。

标记方法和步骤                                         

(1) 实验前准备

1) 请仔细阅读本说明书，本试剂盒可进行4次标记实验，每次标记实验的最佳标记量为0.1mg，可接受标记量为0.05-0.2mg。

2) 将处于冷冻或冷藏状态的待标记物提前恢复室温。

3) 将R1试剂进行瞬时离心以确保固体物处于管底。

4) 请打开水浴锅或培养箱，并设置工作温度为37±1℃。

(2) 标准操作方法

1) 取1支滤过浓缩管垂直放在离心管架上，使用移液器分别加入200 μL置换液和0.1mg待标记蛋白，轻轻吹打混匀，TIP头不要触碰到液体底部的滤膜；

注意：①如果0.1mg的待标记蛋白体积＞300μL时，先使用上述滤过浓缩管浓缩至＜300μL后，再加200 μL置换液；

2) 8000 g离心5min（滤膜上若仍有残留液体可适当延长离心时间以除尽），弃废液；使用移液器加入100 μL置换液，轻轻吹打混匀，垂直放在离心管架上备用；

3) 取1支AF350荧光染料（R1试剂）垂直放在离心管架上，加入2mL AF350荧光染料溶剂，震荡混匀后立即取5μL加入步骤2）中备用的滤过浓缩管内，轻轻吹打混匀；

4) 用封口膜将滤过浓缩管密封并置37℃±1℃孵育20min；

5) 滤过浓缩管内加入300 μL清洗液，轻轻吹打混匀，8000 g离心5min，弃废液；重复步骤3次；

6) 滤过浓缩管内加入200 μL清洗液，使用移液器连续轻轻吹打20次以充分回收标记物。将滤过浓缩管内溶液全部转移至冻存管内。此回收溶液即为标记了AF350荧光染料的蛋白溶液，可根据需要进行下一步实验应用或保存。

常见问题解释                                         

(1) 哪些蛋白或分子可以使用本试剂盒进行AF350荧光染料标记？

条件①：待标记蛋白分子量需要＞30 kD；

条件②：待标记蛋白需要含氨基（NH2-）结构。

满足以上两个条件的蛋白均能使用本试剂盒标记。若待标记物不满足以上条件，请选择本公司其他规格的标记试剂盒。

(2) 本试剂盒可标记多少mg蛋白？

      本试剂盒可进行4次标记实验，每次标记实验的最佳标记量为0.1mg。即可以做4次标记实验，一共可标记0.4mg蛋白。如果需要标记的蛋白量更大，请选择本公司其他规格的标记试剂盒。

(3) 本试剂盒标记后的蛋白储存条件？

短期（≤30天）保存在2-8℃，长期保存≤-20℃（等比例添加甘油）

如有需要，请选择本公司AF350荧光染料标记蛋白保存液。

(4) 本试剂盒标记后的蛋白稳定性如何？

偶联物的稳定性很大程度上取决于蛋白质本身。使用本试剂盒标记

的AF350荧光染料化单克隆抗体，经免疫检测平台验证，具有较

好的热稳定性和实时稳定性。如需要提升标记产物的稳定性，可实

验室自行筛选含稳定成分的缓冲液，也可选择本公司配套的AF350

荧光染料标记产物稳定缓冲液。

(5) 如有其他问题请联系技术支持。

注意事项

(1) 使用前请仔细阅读本说明书。若有疑问请先与技术支持确认，再开始标记实验！

(2) 请在通风良好的实验室内使用本试剂盒。

(3) 本试剂盒AF350荧光染料溶剂（R2试剂）含DMSO成分，标记实验产生的废液请及时密封、处理。

(4) 本试剂盒仅限于科学研究领域的专业人员使用。

(5) 本试剂盒仅供实验室研究使用，不得用于临床诊断或临床治疗，不得用于食品或药品，不得储存在普通民房住宅内。

(6) 使用本试剂盒时，请穿实验服并佩戴口罩和一次性手套。

基本信息                                                 

无锡子晓生物科技有限公司         

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*本试剂盒仅供实验室研究使用！